激光共聚焦顯微鏡是一種高科技顯微鏡;以熒光顯微鏡成像為基礎(chǔ),加裝了激光掃描裝置,計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖像處理,使用紫外或可見光激發(fā)熒光探針,得到細(xì)胞或組織內(nèi)部細(xì)微結(jié)構(gòu)的熒光圖像。
原理:
激光共聚焦顯微鏡利用放置在激光光源后的照明針孔和放置在檢測器前的探測針孔,實(shí)現(xiàn)點(diǎn)照明和點(diǎn)探測。激光光源通過照明針孔發(fā)射出的光,聚焦在樣品焦平面的某個(gè)點(diǎn)上,該點(diǎn)所發(fā)射的熒光在探測針孔上成像,該點(diǎn)以外的任何發(fā)射光均被探測針孔阻擋。照明針孔與探測針孔對被照射點(diǎn)或被探測點(diǎn)來說是共軛的,因此被探測點(diǎn)即共焦點(diǎn),被探測點(diǎn)所在的平面即共焦平面。計(jì)算機(jī)以“像點(diǎn)”的方式將被探測點(diǎn)顯示在計(jì)算機(jī)屏幕上,為了產(chǎn)生一幅完整的圖像,由光路中的掃描系統(tǒng)在樣品焦平面上掃描,從而產(chǎn)生一幅完整的共焦圖像。只要載物臺(tái)沿著Z軸上下移動(dòng),將樣品新的一個(gè)層面移動(dòng)到共焦平面上,樣品的新層面又成像在顯示器上,隨著Z軸的不斷移動(dòng),就可得到樣品不同層面連續(xù)的光切圖像。