光學(xué)顯微鏡和掃描電子顯微鏡常用于金屬材料的研究和開發(fā)。光學(xué)顯微鏡是一種二維形態(tài)工具,有效分辨率低,景深小,不能縱向觀察三維形狀。掃描電子顯微鏡樣品制備復(fù)雜,有時會造成樣品損傷,限制掃描面積和材料表面高度,無法測量面積、體積和深度等信息。利用激光共聚焦顯微鏡進行相應(yīng)的檢測,不僅可以獲得與掃描電鏡相當?shù)娘@微圖像,而且可以進行快速無損的測量。此外,其低引進和維護成本更符合當前行業(yè)成本控制的需要。
激光共聚焦顯微鏡利用激光束掃描樣品焦面的每個點,通過照明針孔形成點光源,并將樣品上的照射點成像在探針針孔上,可以實時動態(tài)觀察和檢測活細胞的結(jié)構(gòu)、分子和離子??蛻艨筛鶕?jù)需要配置各種放大倍率的物鏡,自動鏡頭轉(zhuǎn)臺可以隨鏡頭輕松更換,不需要再次對焦,非常方便。基于“大焦量反射光”共聚焦原理的顯微鏡測量精度受到讀取反射光峰值能力的影響。在光接收機前面設(shè)計了針孔共焦模式。針孔的直徑只有幾十米,其作用是在不聚焦的情況下切斷反射光。
激光共聚焦顯微鏡在細胞觀察上的應(yīng)用:
1、組織細胞熒光定量分析法
顯示熒光在形態(tài)和結(jié)構(gòu)上的位置,常用于原位分子雜交、腫瘤細胞凋亡觀察、DNA損傷、單細胞水平修復(fù)等定量分析。
2、細胞間通訊的研究及物理化學(xué)成分
3、細胞內(nèi)鈣和 ph 的動態(tài)分析
利用熒光探針,激光共聚焦顯微鏡可以提高測量單個細胞內(nèi) pH 和多種功能離子在活細胞內(nèi)的濃度及變化。