激光共聚焦顯微鏡是一種現(xiàn)代生物醫(yī)學圖像儀器。它基于熒光顯微鏡的成像,并配備了激光掃描設備,使用紫外線或可見光來激發(fā)熒光探針。
通過計算機進行圖像處理,以獲得細胞或組織內的精細結構的熒光圖像,并觀察亞細胞水平的生理信號如Ca2 +,pH,膜電位和細胞形態(tài)的變化。
激光共聚焦顯微鏡是20世紀80年代中期開發(fā)并廣泛使用的新技術。它是激光,電子成像和計算機圖像處理的現(xiàn)代高科技手段,并與傳統(tǒng)的光學顯微鏡。結合生物學和醫(yī)學領域生產的細胞分子生物學分析儀器,它已成為生物醫(yī)學實驗研究不可或缺的工具。
傳統(tǒng)的熒光顯微鏡使用熒光物質來標記細胞中的特定結構,不僅增強了圖像與背景之間的對比度,而且因為許多熒光顯微鏡光源使用短波紫外光,這大大提高了分辨率。
然而,當觀察到的熒光樣品稍厚時,顯示出常規(guī)熒光顯微鏡的不可克服的缺點:焦平面外的熒光結構模糊和微弱。原因是大多數(shù)生物標本是分層重疊的結構,并且焦平面在普通光下變化顯微鏡。
會顯示不同的形式。如果熒光標記的結構以不同的水平分布并重疊,則落射熒光顯微鏡不僅收集來自焦平面的光,而且來自焦平面上方或下方的散射熒光被物鏡接收。顯微鏡的光學分辨率大大降低。
激光共聚焦顯微鏡在傳統(tǒng)光學顯微鏡的基礎上,以激光為光源,采用共軛聚焦原理和裝置,利用計算機對觀察圖像進行觀察,分析和輸出。其特征在于通過斷層掃描對樣本進行掃描和成像,用于非侵入性觀察和分析細胞的三維結構。
同時,利用免疫熒光標記和離子熒光標記探針,該技術不僅可以觀察固定細胞,組織切片,還可以實時動態(tài)觀察和檢測亞細胞水平的活細胞結構,分子,離子和生命活動。觀察生理信號的變化,如Ca2 +,pH,膜電位和細胞形態(tài),成為形態(tài)學,分子細胞生物學,神經科學,藥理學和遺傳學領域新一代強大的研究工具,大大地豐富了人們對細胞生命現(xiàn)象。