激光共聚焦顯微鏡對(duì)于樣品有一系列特殊的要求，這些要求旨在確保樣品能夠在顯微鏡下得到清晰、準(zhǔn)確的觀測(cè)結(jié)果。以下是對(duì)這些要求的詳細(xì)歸納：

一、生物樣品要求

熒光表達(dá)正常：

樣品應(yīng)在熒光顯微鏡下預(yù)先觀察，以確定熒光表達(dá)是否正常，從而判斷是否有必要使用激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行進(jìn)一步觀察。

蓋玻片厚度：

蓋玻片的厚度要求通常小于或等于0.17mm，以確保光線的穿透性和圖像的清晰度。

明確激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)：

需要明確樣品的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，以便選擇合適的激光光源和濾光片進(jìn)行觀測(cè)。

掃描區(qū)域和參數(shù)：

如果需要進(jìn)行三維重構(gòu)，需要明確掃描區(qū)域的大小、位置和Z步進(jìn)等參數(shù)，這些參數(shù)會(huì)影響測(cè)試時(shí)間和圖像的分辨率。

樣品貼壁：

樣品B須貼壁良好，不能懸浮起來(lái)。對(duì)于細(xì)胞樣品，需要在載玻片上固定好后送樣測(cè)試。

抗熒光淬滅劑：

在進(jìn)行顯微成像時(shí)，樣品需要加入抗熒光淬滅劑，以防止熒光信號(hào)的減弱或消失。

二、材料樣品要求

樣品制備：

材料樣品需要提前制備好，以確保其表面平整、無(wú)雜質(zhì)，并適合激光共聚焦顯微鏡的觀察。

樣品尺寸：

樣品的尺寸沒有具體要求，但拍出來(lái)的圖像面積應(yīng)在一定范圍內(nèi)（如1.11x1.8mm到5x5mm），并且顏色可調(diào)。

樣品平整性：

樣品B須平整，以確保光線的均勻照射和圖像的清晰度。不平整的樣品可能會(huì)導(dǎo)致圖像模糊或變形。

三、通用要求

熒光探針標(biāo)記：

樣品通常需要經(jīng)過(guò)熒光探針標(biāo)記，以便在激光共聚焦顯微鏡下觀察到特定的結(jié)構(gòu)或成分。

樣品固定：

無(wú)論是生物樣品還是材料樣品，都需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)墓潭ㄌ幚?，以確保樣品在觀察過(guò)程中不會(huì)移動(dòng)或變形。

載玻片和蓋玻片質(zhì)量：

載玻片和蓋玻片應(yīng)選擇質(zhì)量好、光潔、無(wú)雜質(zhì)的材料。對(duì)于重要的實(shí)驗(yàn)，需要提前檢查載玻片和蓋玻片的光學(xué)特性，確保無(wú)熒光干擾。

封片劑選擇：

封片劑通常選擇甘油：PBS混合液（如9:1的比例），以確保樣品的穩(wěn)定性和清晰度。

綜上所述，激光共聚焦顯微鏡對(duì)于樣品的要求較為嚴(yán)格，需要確保樣品的熒光表達(dá)正常、尺寸合適、平整無(wú)雜質(zhì)，并經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)墓潭ê蜆?biāo)記處理。這些要求旨在提高觀測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。