熒光是一種物理現(xiàn)象，其中特定的化合物（熒光染料）在被另一種顏色的光照射后很快就會發(fā)出特定顏色的光。在本文中，我們簡要介紹了熒光物理學和現(xiàn)代熒光顯微鏡的設計要點。我們在實際意義上進一步討論了熒光染料以及了解它們的激發(fā)和發(fā)射光譜的重要性。除了熒光串擾引起的假陽性結(jié)果問題外，還討論了單熒光和多熒光應用中的適當過濾。

為了使樣品適合熒光顯微鏡檢查，它是熒光的。有幾種創(chuàng)建熒光樣品的方法；主要技術是用熒光染料標記，或者在生物樣品的情況下，熒光蛋白的表達。或者，可以使用樣品的固有熒光（即自發(fā)熒光）。在生命科學中，熒光顯微鏡是一種強大的工具，它允許對樣本進行特異性和敏感的染色，以檢測蛋白質(zhì)或其他感興趣的分子的分布。因此，生物樣品的熒光染色技術多種多樣。

生物熒光

許多熒光染料是為一系列生物分子設計的。其中一些是本質(zhì)上具有熒光并結(jié)合感興趣的生物分子的小分子。其中主要的例子是核酸染色劑，如DAPI和Hoechst（由紫外波長光激發(fā)）和 DRAQ5 和 DRAQ7（由紅光激發(fā)），它們都與DNA的小溝結(jié)合，從而標記細胞核。其他是藥物、毒素或結(jié)合特定細胞結(jié)構(gòu)并已用熒光報告分子衍生的肽。這類熒光染料的一個主要例子是鬼筆環(huán)肽，它用于染色肌動蛋白。哺乳動物細胞中的纖維。一種新的肽，稱為膠原雜交肽，也可以與熒光團結(jié)合，用于染色變性的膠原纖維。使用結(jié)合纖維素或果膠的染色劑或染料對植物細胞壁進行染色。對能夠?qū)χ参锛毎M行活體成像的高特異性熒光探針的探索仍在進行中。

熒光蛋白

現(xiàn)代遺傳學的理解和可用于修飾 DNA 的技術使科學家能夠?qū)Φ鞍踪|(zhì)進行基因修飾，從而也攜帶熒光蛋白報告基因。在生物樣品中，這允許科學家直接使感興趣的蛋白質(zhì)發(fā)熒光。然后可以直接跟蹤蛋白質(zhì)的位置，包括在活細胞中。